免疫磁珠法分離細(xì)胞原理

免疫磁珠法分離細(xì)胞原理

免疫磁珠法分離細(xì)胞原理：
    免疫磁珠法分離細(xì)胞是基于細(xì)胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結(jié)合，在外加磁場(chǎng)中，通過(guò)抗體與磁珠相連的細(xì)胞被吸附而滯留在磁場(chǎng)中，無(wú)該種表面抗原的細(xì)胞由于不能與連接著磁珠的特異性單抗結(jié)合而沒(méi)有磁性，不在磁場(chǎng)中停留，從而使細(xì)胞得以分離。

免疫磁珠法分為陽(yáng)性分離法和陰性分離法：
    陽(yáng)性分離法－磁珠結(jié)合的細(xì)胞就是所要分離獲得的細(xì)胞
    陰性分離法－磁珠結(jié)合不需要的細(xì)胞，游離于磁場(chǎng)的細(xì)胞為所需細(xì)胞

一般而言，陰性分離法的磁珠用量比陽(yáng)性分離法的大，陽(yáng)性分離法用行更多。

BD™ Imag 磁珠：
· 大小在0.1－0.45mm
· 包被了BD Pharmingen生產(chǎn)的高質(zhì)量單抗
· 磁珠已為白細(xì)胞亞群的陽(yáng)性和陰性分離法所優(yōu)化
· 用于BD™ IMagnet direct magnet 
    將包被了特異性單抗的BD IMag磁珠加入細(xì)胞懸液，磁珠特異性地與有相應(yīng)抗原的細(xì)胞亞群結(jié)合，通過(guò)BD™ IMagnet direct magnet分離得到的連有BD IMag磁珠的細(xì)胞可直接用于功能試驗(yàn)和用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

缺點(diǎn)：
• 對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械壓力，影響其生物學(xué)活性，不利于分離后培養(yǎng)
• 純度低
• 容易阻塞FCM的噴嘴 

BD IMag吸收大磁珠和小磁珠分離系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)，開(kāi)發(fā)出直徑約200nm中等大小磁珠。
• 技術(shù)簡(jiǎn)單，分離在普通的試管中完成
• 易于增大細(xì)胞用量
• 對(duì)細(xì)胞溫和，不影響細(xì)胞功能及其分離后培養(yǎng)，可直接上流式
• 純度高，回收率高
• 成本低
    此外，Mouse lineage panel中biotin標(biāo)記的抗體還可用于FCM分析細(xì)胞表面抗原，以及進(jìn)行細(xì)胞/組織免疫熒光實(shí)驗(yàn)。
 

BD提供2種免疫磁珠：
· 包被了針對(duì)白細(xì)胞亞群的單抗的磁珠
· 包被了鏈霉親和素（streptavidin）的磁珠：此種情況下，在實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中加入生物素標(biāo)記的單抗，磁珠通過(guò)streptavidin與生物素標(biāo)記的單抗結(jié)合，單抗與細(xì)胞表面相應(yīng)抗原特異性結(jié)合而使細(xì)胞被磁珠間接捕獲，從而達(dá)到分離。這種磁珠使研究者可根據(jù)自己需要選擇生物素標(biāo)記的各種單抗去分離目的細(xì)胞，應(yīng)用范圍更廣泛，使用更靈活。

不同物種磁珠分離試劑
人： CD3, CD4, CD8, CD14, CD19；
小鼠： CD4, CD8a, CD14, CD45R/B220, CD90.2 （Thy1.2）, CD11b, Ly-6G.
ë 利用Streptavidin連接的磁珠，只需選配biotin標(biāo)記的所需單抗,就能分離更多種類(lèi)細(xì)胞

新貨聚焦：
    現(xiàn)在，BD PMG又推出用于分離小鼠造血干細(xì)胞/祖細(xì)胞的新試劑mouse lineage panel。
其中包括5種biotin標(biāo)記單抗，這些單抗能結(jié)合小鼠造血細(xì)胞的主要分化系細(xì)胞: T、B淋巴細(xì)胞，單核/巨噬細(xì)胞，粒細(xì)胞和紅細(xì)胞。將這組試劑與Streptavidin Plus BD™ IMag Particles （557812） 聯(lián)合使用，就能通過(guò)免疫磁性分離法去除小鼠骨髓造血細(xì)胞的主要分化系細(xì)胞，從而富集到造血干細(xì)胞和祖細(xì)胞（陰性片斷）。

Mouse Lineage Panel（559971）：（5×2ml/vial） 可分離109 Mouse骨髓細(xì)胞
1） Biotin-anti-mouse CD3e （CD3 e chain）；
2） Biotin-anti-mouse CD11b；
3） Biotin-anti-mouse CD45R/B220；
4） Biotin-anti-mouse Ly-6G and Ly-6C （Gr-1）；
5） Biotin-anti-mouse TER-119/Erythroid Cells （Ly-76）

磁分離細(xì)胞的重要指標(biāo)是：
    純度和得率，這取決于磁珠所連接單抗的特異性和磁珠大小（磁性），然而太大的磁珠會(huì)影響細(xì)胞活性，也無(wú)法直接上流式。
目前市場(chǎng)上有2種磁性細(xì)胞分離系統(tǒng)：
* Small particles （≈50 nm） － MACS
* Large particles （1200~4500 nm） －others（如Dynal）
小磁珠 優(yōu)點(diǎn)：
• 對(duì)細(xì)胞溫和，不影響分離細(xì)胞的后續(xù)培養(yǎng)
• 可直接上流式檢測(cè)，不影響散射光
缺點(diǎn)：
• 需要很強(qiáng)的磁場(chǎng)來(lái)分離細(xì)胞
• 分離速度很慢，得率不高
• 需要一次性的分離柱，不能在普通試管進(jìn)行
• 成本昂貴
大磁珠 
• 技術(shù)簡(jiǎn)單，分離可在試管中完成
• 易于增減細(xì)胞用量
• 速度快，得率高
• 成本低